柱效驗證：新柱或長期保存后的色譜柱使用前，需用標準糖混合溶液（如葡萄糖、果糖、蔗糖濃度均為 10mg/mL）進行柱效驗證。通過高效液相色譜（HPLC）檢測，若相鄰組分分離度（R）≥1.5、理論塔板數(shù)（N）符合出廠指標（通常≥5000/m），且保留時間相對標準偏差（RSD）≤1%，方可投入使用；

流動相適配：根據(jù)色譜柱類型選擇兼容流動相：氨基柱常用乙腈 - 水混合體系（乙腈體積占比 70%-90%），鈣離子交換柱常用超純水或稀硫酸溶液（pH 2.5-5.5）。嚴禁將酸性過強（pH＜2）或堿性過強（pH＞8）的流動相通入氨基柱，避免鍵合相水解；

系統(tǒng)沖洗：連接色譜柱前，需用 0.45μm 濾膜過濾流動相并超聲脫氣（脫氣時間≥20 分鐘），同時用流動相沖洗輸液管路和進樣閥（沖洗體積≥10 倍管路體積），防止管路中殘留的酸、堿或雜質(zhì)污染色譜柱。

樣品前處理：糖類樣品需經(jīng)離心（轉(zhuǎn)速≥8000rpm，時間 10 分鐘）或 0.22μm 濾膜過濾，去除蛋白質(zhì)、顆粒物等雜質(zhì)，避免堵塞色譜柱孔隙（孔徑通常為 80-120?）；若樣品含強極性雜質(zhì)（如有機酸），需通過固相萃取（SPE）柱凈化，防止雜質(zhì)與固定相結(jié)合導(dǎo)致柱效下降；

進樣量控制：氨基柱單次進樣量不宜超過 20μL（濃度≤20mg/mL），鈣離子交換柱單次進樣量不宜超過 50μL，過量進樣會導(dǎo)致色譜峰展寬、拖尾，長期如此會造成固定相過載；

流速與溫度設(shè)定：常規(guī)使用流速控制在 0.8-1.2mL/min，避免流速過高（＞1.5mL/min）產(chǎn)生過大柱壓（氨基柱柱壓需＜20MPa，鈣離子交換柱需＜15MPa）；柱溫根據(jù)糖類類型調(diào)整，如分析單糖時柱溫設(shè)為 30-40℃，分析多糖時設(shè)為 40-50℃，溫度波動需控制在 ±1℃以內(nèi)，防止保留時間漂移。

常規(guī)沖洗：每日分析結(jié)束后，需用流動相對色譜柱進行沖洗：氨基柱先用 50% 乙腈水溶液沖洗 10-15 柱體積（CV），去除殘留糖組分，再用純乙腈沖洗 15-20CV，確保柱內(nèi)無水分殘留；鈣離子交換柱用超純水沖洗 20-30CV，去除柱內(nèi)鹽分；

特殊污染處理：若樣品中含油脂、色素等強吸附性物質(zhì)，氨基柱可先用乙腈 - 四氫呋喃（9:1）混合液沖洗 5-8CV，再按常規(guī)流程沖洗；鈣離子交換柱可先用 0.1mol/L 硝酸溶液沖洗 5CV，再用超純水沖洗至中性（pH 6-7）；

柱壓監(jiān)測：沖洗過程中實時監(jiān)測柱壓，若柱壓較初始值升高 30% 以上，需暫停使用，排查是否存在管路堵塞或柱內(nèi)污染，嚴禁強行高壓沖洗。

沖洗：長期保存（超過 1 周不使用）前，需進行深度沖洗：氨基柱需用純乙腈沖洗 25-30CV，確保柱內(nèi)水分含量低于 0.1%，防止硅膠基質(zhì)水解；鈣離子交換柱需用含 0.01mol/L 的超純水沖洗 15-20CV，可抑制微生物生長，避免柱內(nèi)出現(xiàn)菌團堵塞孔隙；

柱端處理：沖洗完成后，斷開色譜柱與管路的連接，立即用專用柱帽（含聚四氟乙烯墊片）密封柱兩端，確保密封緊密，防止空氣進入柱內(nèi)形成氣泡，或保存液揮發(fā)導(dǎo)致固定相干裂；

標簽標注：在色譜柱標簽上注明保存日期、保存液類型（如 “2024-XX-XX，純乙腈保存"）及上次使用時的柱效數(shù)據(jù)，便于后續(xù)使用前快速確認狀態(tài)。

溫度控制：冷藏溫度需穩(wěn)定在 2-8℃，可儲存于實驗室專用冷藏柜（波動范圍 ±1℃），嚴禁冷凍（＜0℃），因水或有機相結(jié)冰會導(dǎo)致固定相顆粒破裂，破壞填充床結(jié)構(gòu)；氨基柱若在室溫下長期保存（＞25℃），會加速氨基鍵合相的氧化降解，柱效每月下降 10%-15%；

環(huán)境濕度：冷藏柜內(nèi)相對濕度需控制在 40%-60%，避免濕度過高導(dǎo)致柱帽生銹或水分滲入柱內(nèi)，濕度過低則可能導(dǎo)致保存液少量揮發(fā)，可在冷藏柜內(nèi)放置硅膠干燥劑（每周更換一次）；

儲存位置：色譜柱需垂直放置于冷藏柜內(nèi)，避免水平或傾斜放置，防止固定相因重力作用發(fā)生沉降，導(dǎo)致柱內(nèi)出現(xiàn)空隙，影響分離均勻性；同時遠離冷藏柜出風(fēng)口，避免溫度波動過大。

氨基柱：因硅膠基質(zhì)易水解，保存液必須為無水有機溶劑（如純乙腈、異丙醇），且需每 3 個月更換一次保存液，防止保存液吸潮；若發(fā)現(xiàn)保存液出現(xiàn)渾濁或柱端有白色沉淀，需立即用純乙腈沖洗后重新密封；

鈣離子交換柱：保存液需含微量防腐劑，但需注意具有毒性，操作時需佩戴手套和護目鏡；若長期不使用（超過 3 個月），建議每月取出色譜柱，用保存液沖洗 5-10CV 后重新密封冷藏；

聚合物基質(zhì)色譜柱（如聚苯乙烯 - 二乙烯苯柱）：雖耐酸堿性能較好，但仍需用 50% 甲醇水溶液封閉冷藏保存，避免固定相因干燥收縮變形，保存溫度可放寬至 0-10℃。

峰拖尾（拖尾因子 T＞1.5）：若為氨基柱，多因流動相含水量過高或柱內(nèi)殘留酸性物質(zhì)，需減少流動相含水量（如乙腈占比從 80% 提升至 85%），并用含 0.1% 三乙胺的乙腈 - 水（9:1）溶液沖洗 5-8CV；若為鈣離子交換柱，多因柱內(nèi)有金屬離子污染，需用 0.05mol/L EDTA 溶液沖洗 10CV，再用超純水沖洗至中性；

分離度下降：若相鄰糖峰重疊，需降低流速（如從 1.0mL/min 降至 0.8mL/min）或調(diào)整柱溫（如升高 5-10℃）；若柱效持續(xù)下降，需檢查是否存在固定相流失，可通過紫外檢測器在 254nm 處監(jiān)測流動相，若出現(xiàn)吸收峰（吸光度＞0.01AU），表明固定相流失，需更換色譜柱；

柱壓驟升：先斷開色譜柱，檢測管路柱壓，若管路柱壓正常，說明色譜柱堵塞，可嘗試用低流速（0.2-0.3mL/min）的兼容溶劑反向沖洗（氨基柱用純乙腈，鈣離子交換柱用超純水），沖洗時間≥2 小時，若柱壓仍無下降，需報廢色譜柱。

保存后柱效大幅下降：若氨基柱保存后柱效下降，多因保存液吸潮導(dǎo)致硅膠水解，需用純乙腈沖洗 20-30CV，再重新驗證柱效；若鈣離子交換柱柱效下降，可能是微生物滋生，需用含 0.05% 次氯酸鈉的超純水沖洗 10CV，再用保存液沖洗后重新冷藏；

柱端出現(xiàn)氣泡：因密封不嚴導(dǎo)致空氣進入柱內(nèi)，需將色譜柱連接系統(tǒng)，用低流速（0.2mL/min）的流動相正向沖洗，同時輕輕拍打柱體，排出氣泡，沖洗至柱壓穩(wěn)定后再正常使用；

保存液泄漏：多因柱帽密封墊片老化，需更換新的聚四氟乙烯墊片，重新密封時注意力度適中（扭矩約 0.5-0.8N?m），避免過度擰緊導(dǎo)致柱端破裂。

專用系統(tǒng)使用：糖檢測色譜柱應(yīng)單獨用于糖類分析，避免與蛋白質(zhì)、強極性有機物等樣品共用，防止交叉污染；

定期維護：每月對未使用的色譜柱進行一次 “喚醒" 維護，取出后用保存液沖洗 5-10CV，重新密封冷藏，防止保存液變質(zhì)；

記錄管理：建立色譜柱使用臺賬，記錄每次使用的樣品類型、流動相組成、柱效數(shù)據(jù)及保存情況，便于追溯問題原因；

應(yīng)急處理：若發(fā)生流動相誤選（如將酸性流動相通入氨基柱），需立即停止進樣，用大量兼容溶劑（如純乙腈）沖洗，沖洗體積≥50CV，再檢測柱效，若柱效無法恢復(fù)，需及時更換。